標(biāo)題：顯微鏡下在單細(xì)胞個(gè)體水平上測定細(xì)菌分析顯微鏡
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作者:yiyi發(fā)布
時(shí)間:2017-8-16 20:04:19
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正文:
顯微鏡下在單細(xì)胞個(gè)體水平上測定細(xì)菌分析顯微鏡
GFP作為細(xì)菌基因表達(dá)的報(bào)道基因
熒光標(biāo)記與報(bào)道基因技術(shù)的結(jié)合使用被證明是植物上細(xì)菌行為
的一種有力的研究工具。熒光報(bào)道基因和目的細(xì)菌基因的融合使得
我們能夠在顯微鏡下在單細(xì)胞個(gè)體水平上測定細(xì)菌基因的轉(zhuǎn)錄活性
，而不是在群體水平上。因此，在特定環(huán)境下我們就能夠測定基因
的轉(zhuǎn)錄活性的分布，由此可進(jìn)一步了解基因潛在表型所發(fā)揮的作用
。
除非實(shí)驗(yàn)研究是在無菌條件下開展，否則還需要一個(gè)額外的標(biāo)
記基因來將研究細(xì)菌對(duì)象與植物本身的內(nèi)生細(xì)菌區(qū)分開來。額外標(biāo)
記的使用將確保由于所包含的目的基因轉(zhuǎn)錄活性低甚至沒有從而導(dǎo)
致報(bào)道基因信號(hào)很低的細(xì)菌能夠被檢測出來。在首次該類研究中，
Brandl等人將功基因與E. herbicola的生長素( IAA)合成基因融合
在一起，用熒光原位雜交(FISH)技術(shù)研究IAA合成在這種豆葉細(xì)菌E
. herbicola種類中的分布。將含有功融合基因的轉(zhuǎn)化FL herbicol
a菌株接種在植物上，培養(yǎng)以使細(xì)菌生長定植。然后，從葉片表面
將細(xì)菌細(xì)胞漂洗下來，在顯微鏡玻片上用對(duì)E. herbicola特異性的
四甲基羅丹明標(biāo)記的16S rRNA探針進(jìn)行熒光原位雜交。對(duì)獲得的熒
光顯微圖像進(jìn)行數(shù)字分析來測定經(jīng)FISH染成紅色的細(xì)菌細(xì)胞所發(fā)出
的綠色熒光強(qiáng)度。單細(xì)胞GFP熒光強(qiáng)度的分布頻率表明，在葉面上
僅有很小比例的E. herbicola細(xì)胞高水平地表達(dá)了IAA基因，表明
葉片表面存在某些微生境有助于IAA的大量產(chǎn)生。隨后采用同樣方
法的研究表明，E. herbicola可利用的蔗糖和果糖，Pseudomonas
syringae(13]可利用的鐵離子在植物表面的分布是不均勻的。在上
面的所有研究中，熒光原位雜交能夠?qū)ν环N細(xì)菌在菌株水平上進(jìn)
行特異性的標(biāo)記。此外，利用羅丹明來標(biāo)記16S rRNA探針?biāo)l(fā)出的
熒光發(fā)射光譜信號(hào)與GFP熒光信號(hào)有明顯的區(qū)別，從而可避免對(duì)顯
微鏡濾光下熒光信號(hào)的錯(cuò)誤判斷。光學(xué)串?dāng)_是在多標(biāo)記熒光實(shí)驗(yàn)的
一個(gè)主要問題。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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