標(biāo)題：熒光顯微技術(shù)-激發(fā)光的波長細(xì)胞成分試驗(yàn)檢測
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作者:yiyi發(fā)布
時(shí)間:2018-11-11 2:47:36
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正文:
熒光顯微技術(shù)-激發(fā)光的波長細(xì)胞成分試驗(yàn)檢測
活體染色中的熒光和熒光染料
熒光是分子吸收光能后直接發(fā)光的現(xiàn)象。除極個(gè)別外，發(fā)射光總是比
激發(fā)光的波長要長。發(fā)射光的波長決定于熒光物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)而且并不隨
著激發(fā)波長而變化。然而，當(dāng)激發(fā)光的波長太長時(shí)，則無熒光發(fā)生。由此
，為保證在整個(gè)可見光譜區(qū)域內(nèi)都能發(fā)射熒光，激發(fā)光的波長必須比藍(lán)光
短(即激發(fā)光波長必須在紫外線范圍內(nèi))。
熒光顯微技術(shù)研究顯微標(biāo)本的熒光。Reichert研制了第一臺(tái)熒光顯微
鏡，奠定了這項(xiàng)技術(shù)的基礎(chǔ)工作。
起初，碳弧光用作紫外光源。后來，具有高得多的強(qiáng)度的發(fā)射紫外光
的高壓汞蒸氣燈得到應(yīng)用。兩種光源都會(huì)輻射相當(dāng)數(shù)量的可見光和熱，這
些光和熱必須被適當(dāng)?shù)臑V光片吸收。除濾光片外，可以應(yīng)用暗視野照明法
以防止光源直接照射物鏡。當(dāng)鏡檢標(biāo)本通過暗視野照光時(shí)，在物鏡和目鏡
問則不需要可見光濾光片，因?yàn)橹挥形矬w發(fā)射的可見熒光能到達(dá)物鏡。在
入射熒光顯微術(shù)中，初級(jí)和次級(jí)熒光都不能穿透標(biāo)本。近年來光學(xué)的發(fā)展
使得顯徽?qǐng)D像的質(zhì)量改進(jìn)很大。由于近紫外光可用作激發(fā)光，一個(gè)高級(jí)玻
璃聚光鏡就足夠了，無需石英鏡片。為了保護(hù)眼睛，在物鏡和目鏡間必須
放置吸濾紫外光片。近紫外光對(duì)活細(xì)胞的損傷也相當(dāng)小。
被研究的樣本本身可篦含有發(fā)熒光的物質(zhì)，被稱為初級(jí)熒光。另外，
必須讓標(biāo)本與熒光物質(zhì)接觸，然后使熒光積累在標(biāo)本的特定結(jié)構(gòu)內(nèi)并用紫
外光輻射而發(fā)射出熒光(次級(jí)熒光)。在后一種情況下所需熒光物質(zhì)稱為熒
光染色劑或熒光染料，這種活體染色劑通過光的選擇性吸收而產(chǎn)生染色。
熒光染料和偏性活體染料一樣用于活細(xì)胞成分的染色，但是使某一細(xì)
胞部位產(chǎn)生可見熒光所需熒光染色劑的量要少得多。因此，在活體染色中
需要使用的熒光染色劑濃度甚低，這就有可能使用那些有一定毒性的熒光
物質(zhì)。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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