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正文:

解剖顯微鏡干冰法制備永久切片步驟
1. 壓片技術
   壓片技術是使細胞組織解離成主要細胞群或使小細胞群散開成單一個體，有助于對個體細胞和其組織結構的研究。在高等植物中僅發(fā)現(xiàn)一種組織其細胞呈一致的零散單位，只是借著壓碎細胞便使之分開。這種細胞就是花粉母細胞或一團花粉囊中的花粉。其它組織在作成抹片之前必須先由試劑處理，此試劑將先分解中膠層以使細胞單離。
 壓片組織的方法比石臘切片技術具有下列優(yōu)點：
     A. 較快速獲得結果。
     B. 在石臘切片技術中個體被切開成兩個或更多的切片，而壓片技術則
        保持主體細胞在一起。
     C. 染色體數(shù)可更容易被算出來，且染色體結構更能明白的顯示。
  
   目前壓片技術為染色體觀察常用的方法，因為它不易將細胞壁和細胞質染色而造成觀察的干擾。

2. 常用于壓片技術的染色方法有兩種：
   A. Aceto-carmine染色法
   B. Feulgen染DNA法
3. 以干冰法制備永久切片的流程：
   取蠶豆（Vicia fuba），玉米（Zea mays），豌豆（Pisum sativum）或洋蔥（Allium cepa）之根尖制備抹片，進行有絲分裂周期之觀察，并作成永久切片。
制片流程
1. 拔取兩株幼苗，在燒杯中用水沖洗根部直到去除黏附的蛭石粒子。切下末端1-1.5 cm并且把根尖浸在醋酸和酒精1：3的溶液中抽真空固定20分鐘。
2. 由固定液中取出并以蒸餾水淋洗10分鐘。
3. 傾倒去水，再加室溫之1 N HCl 浸泡2分鐘。
4. 傾倒去冷的HCl，并把玻璃瓶子放在60℃的水浴鍋中的架子上，加入1 N HCl 60℃作用10分鐘，以使根組織軟化。
5. 傾倒出熱的HCl并且加入蒸餾水處理5分鐘。
6. 輕輕倒出水且加入Feulgen試劑到足以蓋過根部即可，在暗處作用至少30分鐘。
7. 輕輕倒出Feulgen試劑放入干凈的容器中，然后用水淋洗3次。
8. 取一根放在干凈的載玻片上，加一滴45％醋酸。用鑷子夾住根基部且用解剖針或刀切下根尖端1-2 mm。用吸水紙拭去所有45％醋酸，只留一小滴在根部尖端四周。
9. 以一只平底玻璃棒慢慢輕敲根部尖端直到細胞完全搗碎。假如經(jīng)適當搗碎，當提起玻璃棒時，搗碎的組織將會呈圣代冰淇淋狀的小丘。使用圓玻棒其直徑約3-4 mm，其兩端以高溫之火加溫至開始熔化時，在一冷的平面玻璃上輕壓，使其表面呈現(xiàn)平滑，即可作為搗碎玻璃棒。搗碎根組織時只宜將玻璃棒作上下敲擊，不宜作如磨墨之順時針方向之圓形動作磨碎。
10. 加一小滴45％的醋酸慢慢的輕輕的劃圓直到細胞擴散開來。把載玻片放
   在幾張紙巾之上，再把蓋玻片斜放在上，且緩緩以拇指使力壓蓋玻片。
11. 擦凈載玻片底部并且在顯微鏡下鏡檢。一直修改壓片的技術直到滿意的
   結果出現(xiàn)即可繼續(xù)下一步驟以干冰法制作永久玻片。染色時間可以增減調(diào)整。