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正文:

透射電子顯微鏡的準確操作和怎樣校正？
   　　電子顯微鏡由于構(gòu)造複雜，操作上亦較一般光學顯微鏡困難，因此除了熟練的操作技巧外，亦須具備精確的校正能力，不論是光學顯微鏡的玻璃透鏡或是電子顯微鏡電磁透鏡，由于制造上不可能達到完美，因此會有像差的產(chǎn)生，其校正方法可用較小的孔徑遮去邊緣的電子而改善，但是會使解像力變差。由于磁場的不對稱使電子進入透鏡時在不同軸面之偏轉(zhuǎn)程度不同而使影像變形，此時可利用像散校正器加強磁場較弱的軸面使之對稱。一個電子顯微鏡的操作員必須知道如何校正像差方可得到較高之解像力，現(xiàn)將基本操作與校正步驟分述如下：
   
2.1.  開機
   　　首先必須打開電源開關(guān)及冷卻水系統(tǒng)，然后啟動真空系統(tǒng)，先以迴轉(zhuǎn)式唧筒抽至 10-2 torr，再以擴散式唧筒抽至 10-4 ～ 10-6 torr 方可使用�，F(xiàn)代的電子顯微鏡均設(shè)計成全自動真空系統(tǒng)，無需人為操作，可避免人為疏忽而造成油氣倒灌，通常約 20 分鏡可完成。
   
2.2.  電子槍的操作與校正
   　　當真空度到達后，便可打開電路系統(tǒng)。首先將加速電壓加至 60 到 100 KV，待電壓穩(wěn)定后再將燈絲加熱至飽和點。燈絲之壽命與真空度及加熱時之溫度有關(guān)，最理想之狀況可維持 40 至 80 小時，所謂燈絲飽和點即當燈絲逐漸加熱時在螢光板上可見燈絲之影像，隨著溫度逐漸加高影像由中空環(huán)形狀逐漸成一實心光點，此即為燈絲之飽和點，燈絲位置之正確與否可由未達飽和點之光環(huán)形狀及在螢光板上可見燈絲之影像，隨著溫度逐漸加高影像由中空環(huán)形狀逐漸成一實心光點，此即為燈絲之飽和點，燈絲位置之正確與否可由未達飽和點之光環(huán)形狀及在螢光板上之位置來判定，并加以校正，使其在螢光板中央形成一對稱的光環(huán)再加熱至飽和點即可。
   
2.3.  聚光鏡與可動孔徑之校正
   　　聚光鏡可將電子束聚集于標本上，并可調(diào)整照明范圍之大小與亮度，通常有一像散校正器可校正磁場之對稱性使電子束成一對稱光點，可變孔徑亦須校正，在選定適當大小之孔徑后，調(diào)整孔徑位置使其在焦前 (under focus) 或焦后 (over focus) 時的照明光點均在同一位置形成同心圓。
   
2.4.  標本置換與物鏡之校正
   　　標本之置換因廠牌與機型而有很大之差異，只須依使用說明書操作即可。物鏡之校正可分為三部份：
2.4.  1.電流中心與電壓中心
   　　電流中心與電壓中心校正乃指一定頻率來回改變物鏡之電流強度或電子槍加速電壓之大小，從影像晃動的方式來判定及校正電子束與鏡柱主軸之對稱性，當電子束與鏡柱主軸一致時，電壓中心可觀察到物體影像以螢光板中央為中心，隨電壓改變的頻率對稱的放大與縮小。而由電流中心則可觀察到影像對稱于中心點沿逆時針與順時針方向來回晃動。若影像晃動不動稱時，可調(diào)整電子束傾斜 (beam tilt) 控制鈕之對稱。
2.4.  2.物鏡可變孔徑之選擇與調(diào)壓
   　　物鏡可變孔徑之大小與影像對比度與解像力有關(guān)；孔徑越小時對比度越高，解像力越差，因此選擇適當大小的物鏡孔徑可提昇影像之清晰度�？讖奖仨氄{(diào)整至主軸中央才不致影響影像品質(zhì)。
2.4.  3.物鏡像散之校正
   　　物鏡是檢體呈像最直接的透鏡，也是影響最大的透鏡，而在各種像差影響中，又以像散最為重要，尤其在高倍率的時候，更為重要。物鏡像散之校正以多孔膜 (holly film) 作為校正之樣品，先在高倍下找到一小圓形小洞，調(diào)至焦后 (over focus) 使小洞邊緣出現(xiàn)一黑圈，調(diào)整像散校正器使黑圈對稱，然后逐漸改變焦距，使小洞邊緣之黑圈消失，若黑圈不同時消失，調(diào)整像散校正器使之對稱，如此來回調(diào)整直到正焦 (just focus) 時，黑圈均勻消失為止。
   
2.5.  對焦與照相
   　　經(jīng)過上述的校正后，只要對焦正確就可得到清楚的影像。通常在正焦時影像之解像力最高，但對比度較差；錯焦 (defocus) 時則會損失解像力，但可提高對比度。通常我們以此微的焦前作為最后對焦狀況，因為此時物體所呈現(xiàn)之影像有較高的對比度，又不會造成影像誤判，尤其是在生物標本的觀察上，對比度的因素遠比解像力重要，故輕微焦前為最理想之結(jié)果。
　　由于電子顯微鏡有相當長的焦深 (depth of focus)，螢光板與底片雖不在同一平面上，但對影像之清晰度完全無影響，也就是說只要在螢光板上對焦正確，底片上可得相同清晰之影像，故對焦完成后，調(diào)整適當亮度與曝光時間即可將螢光板移開，讓影像直接顯現(xiàn)于底片上。曝光完成后經(jīng)過負片顯像及相片沖印即可得到永久的影像。

出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科