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正文:

分離細胞核技術

 將真核細胞的細胞核與細胞其他部分分開, 以利其他實驗之用.

材    料：

Lysis buffer

[配方] 10mM Tris.Cl, pH7.4    3mM CaCl2

   2mM MgCl2

Nonidet P-40(NP-40) lysis buffer B

[配方] 10mM Tris.Cl, pH7.4    3mM CaCl2

   2mM MgCl2    1﹪NP-40

  (前三項配合先高溫高壓消毒后, 待冷卻再加入NP-40)

均質器

方    法：

1.對單層組織培養(yǎng)細胞, 可先到去培養(yǎng)液, 以5ml, 4℃ PBS清洗細胞二次, 再以高溫高壓消毒過之軟膠刮刀將細胞刮下, 并離心1,500rpm, 5min, 4℃； 若為浮懸細胞, 則直接離心1,500rpm, 5min, 4℃, 并以4℃ PBS洗細胞二次(離心, 倒去上清), 本實驗均以5×107細胞量設計.

2.將細胞溶于15μl, 4℃, lysis buffer中, 緩緩溷合, 10min.

3.離心4℃, 1,500rpm, 5min, 倒去上清, 再將細胞溶于1ml lysis buffer中.

4.再加入1ml NP-40 lysis buffer B, 緩緩充分溷合.

5.將細胞吸入均質器, 攪動10次, 取少數(shù)液置血液計數(shù)器, 在顯微鏡下檢視細胞是否只剩細胞核.

6.將只剩細胞核的細胞溶轉入無菌離心管中, 離心1,500rpm, 4℃, 5min.

7.仔細吸除上清, 將沉淀之細胞核置冰上, 再加入200μl之甘油保存液(配方：50mM Tris.Cl, pH8.3

40﹪ glycerol

5mM MgCl2

0.1mM EDTA),

使細胞核溶于液中, 在將之保存在-70℃中.

出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科