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正文:

顯微鏡使用油鏡的原因,為什么視野模糊了用油鏡就好了？

現(xiàn)代光學(xué)顯微鏡大體由光學(xué)系統(tǒng)及機(jī)械系統(tǒng)構(gòu)成, 光學(xué)系統(tǒng)是利用目鏡(eyepiece)和物鏡(objective)兩組透鏡協(xié)調(diào)完成放大標(biāo)本, 其中以物鏡的性能最為重要, 它直接影響顯微鏡的分辯能力, 顯微鏡一般配有四個(gè)放大倍數(shù)的物鏡,  觀察及拍攝細(xì)菌以油鏡(oil immersion objective)最有意義, 使用時(shí)亦和一般物鏡不同: 被較低倍物鏡及發(fā)現(xiàn)目標(biāo)后, 接著將油鏡對(duì)準(zhǔn)載玻片標(biāo)本(Slide specimen), 打量一下載玻片上光線落在穿越它而進(jìn)入油鏡的位置后, 略轉(zhuǎn)開(kāi)油鏡, 并在載玻片上滴上顯微鏡專用香柏油(折射率 n = 1.515), 再把油鏡旋回原處, 調(diào)節(jié)聚光器、載物臺(tái)調(diào)節(jié)器(focusing control), 使映像清晰為止。
使用油鏡技術(shù)的原因如下:
一) 增加照明之亮度: 由于 100x 的物鏡直徑很小, 焦距亦很短, 與其他低倍率物鏡相比, 要提供相若亮度的觀察效果, 所需光照強(qiáng)度卻是最大的。一般物鏡和標(biāo)本之間的介與為空氣(n = 1), 其折射率和玻璃 (n = 1.55)相差較大, 進(jìn)入物鏡的光線會(huì)因折射率的不同而產(chǎn)生折射或全反射, 加入與玻璃折射率相似的香柏油, 由于物鏡和標(biāo)本之間沒(méi)有空氣介界的干擾, 減少了射入物鏡光線的損失, 增加了照明的亮度
二)增加顯微鏡之分辯率 : 分辯率(resolution)是表示顯微鏡能辯別兩點(diǎn)之間最少距離的能力, 最大可分辯距離的數(shù)學(xué)式為 R =  λ/ 2NA (λ為光波波長(zhǎng): 0.4~0.7μm, 而 NA為物鏡的數(shù)值孔徑值 = n x sinα, n為介質(zhì)的折射率, α為光線最大射入角之半, 一般應(yīng)用最大為120度), 根據(jù)上式, 由于香柏油(n = 1.515)比空氣( n = 1.0)的折風(fēng)射率高, 因此使用香柏油能使 NA 值上升至1.2 ~ 1.4(其他物鏡為 < 1.0), 而可見(jiàn)光波波長(zhǎng) λ =0.55μm為計(jì), NA= 0.65的高倍物鏡其 R值為 0.4μm; 而油鏡的 R值約為0.2μm。

獲得滿意的顯微映像后, 采用連接于目鏡上的數(shù)位照相機(jī)(digital camera)將之拍攝下來(lái), 如使用較低倍的顯微拍攝, 會(huì)在標(biāo)本上置一后直徑為5μm金屬線作為比對(duì)之用。