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正文:

細胞繼代培養(yǎng)實驗步驟！利用顯微鏡觀察細胞

細胞繼代培養(yǎng)實驗目的：

細胞生長到高密度時，把細胞收集起來，分殖在新的培養(yǎng)盤中，讓細胞有更多而足夠的空間繼續(xù)生長。

實驗步驟：

1.從冰箱中取出要用到的材料，并利用37℃水浴槽回溫。

2.關閉無菌操作臺UV燈，并開啟無菌操作臺風扇及日光燈。噴酒精于無菌操作臺平面，并擦拭乾淨，以達到消毒效果。

3.將要使用到的物品，噴酒精消毒，并擦拭乾淨，再帶入無菌操作臺內(nèi)。

4.將細胞，噴酒精消毒，并擦拭乾淨，再帶入無菌操作臺內(nèi)。

5.將玻璃吸管接再pump的塑膠吸管上。

6.去除細胞培養(yǎng)液，再加入PBS清洗細胞，并來回輕輕搖擺幾次。

*15公分Dish，加入10ml PBS；9公分Dish，加入5ml PBS。

7.去除PBS，再加入Trypsin。

*15公分Dish，加入5ml Trypsin；9公分Dish，加入3ml Trypsin。

8.放入細胞培養(yǎng)箱 (37℃) 3~5分鐘，以加速酵素作用，使附著型細胞漂浮起來。

9.輕輕拍打幾次，再利用顯微鏡觀察細胞是否全部漂浮起來。

10.噴酒精消毒，并擦拭乾淨，再帶入無菌操作臺內(nèi)。

11.加入與Trypsin同樣體積的細胞培養(yǎng)液，并來回輕輕搖擺幾次溷合，以綜合酵素，阻止酵素繼續(xù)反應。

12.吸取細胞液放入離心管。

13.細胞液給予離心。 (轉速1000rpm，溫度20℃，5分鐘)

14.去除上清液，加入H9C2 medium。

15.利用微量吸管來回吸取，使細胞與H9C2 medium完全平均溷合，形成細胞懸浮液。

16.回種到Dish。

*15公分Dish，總體積25ml H9C2 medium；9公分Dish，總體積10ml H9C2 medium。

17.移至入細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科