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正文:
觀察利用
顯微鏡觀察螺旋菌(spirochetes)需要注意的地方和要點!
用
暗視野顯微鏡(Dark field microscopy)法觀察時,由于充滿著的活spirochetes-螺旋菌可能有高的傳染性,所有的設(shè)備、病人樣本都要小心處理,立即拋棄受汙染的物質(zhì)?吹降募毦诳张、亮光處,為透明實像。若用特殊處理的顯微鏡看則是黑色較大的虛像。
另外,我們也可以用間接免疫螢光法來確認細菌,如Treponema pallidum。將專一性抗體溶液加在切片上,再加入標有螢光物質(zhì)的專一性抗免疫球蛋白之抗體,然后在紫外線螢光顯微鏡下觀察。
Treponema pallidum被固定在玻片上并加入病人的血清。然后沖洗并加入標有螢光物質(zhì)的專一性抗免疫球蛋白之抗體。假如有T. pallidum的病人血清和這種抗體反應(yīng),細菌將被染色(呈+反應(yīng),見下圖)。假如沒有反應(yīng)發(fā)生,螢光抗體將從抹片上被沖走,也就不會有螢光細菌被看到了(呈-反應(yīng))。
為了避免產(chǎn)生交叉反應(yīng),病人血清要先用Reiter treponeme的抽取物來吸附,我們稱這種方法為fluorescent treponemal antibody absorption(FTA-ABS)test,有很高的專一性。
其他血清學(xué)上的IF test有:
VDRL(Veneral Disease Research Lab)、RPR(Rapid Plasma Reagin) test:
測量病人血清中cardiolipin antigen的凝集。
MHA.TP(Microhaemagglutination test for T. pallidum.):針對T.pallidum 所做的微小紅血球凝集試驗。
TPCF(T. pallidium compliment fixation test):檢出率高,但每天都要做一次。
TPI(T. pallidum immobilization test):比較貴,主要是使螺旋菌失去運動性,而固定不動。
Microscopy適用于初期、第二期和生殖期,由skin lesions取分泌物,而不是從oral lesions。因為含有Spirochetes的正常口腔中通常有非致病性卻又像T. pallidum的細菌,導(dǎo)致誤診機率大。
其他的染色法有:
Gimesa stain:先用methanol細流,再用Gimesa solution。但是染起來不很理想。
Fontana stain:先用媒染劑細流,再用silver nitrate solution。
Negative Demonstration of Spirochetes--India ink method:背景為墨水的黑色,細菌處是空泡、透明狀。
由于Spirochetes不但厭氧且需要很高的營養(yǎng),所以大部分是培養(yǎng)不出的。Treponema至目前為止不能用人工培養(yǎng)基培養(yǎng)。