標(biāo)題：使用高倍率顯微鏡觀察細(xì)胞是否有霉?jié){菌
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作者:yiyi發(fā)布
時(shí)間:2013-8-26 17:30:52
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正文:
使用高倍率顯微鏡觀察細(xì)胞是否有霉?jié){菌
霉?jié){菌測試
霉?jié){菌的污染很容易被忽視，本實(shí)驗(yàn)在一開始與后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中不定期
的以 DAPI 染劑檢測細(xì)胞是否遭受霉?jié){菌污染，以下為操作流程:
將養(yǎng)至八分滿的細(xì)胞除去培養(yǎng)基，以 PBS 清洗細(xì)胞表面，再以 2%
formaldehyde 固定 2 分鐘，固定完之后將 formaldehyde 去掉并以 PBS 清洗
細(xì)胞 3 次，每次 10 分鐘，期間皆放置于旋轉(zhuǎn)震蕩器上輕微搖晃，之后以溶
于 PBS 的 0.5% triton X100，將細(xì)胞表面打洞，于室溫下作用 30 分鐘，接
著以 0.9%的鹽 (NaCl) 水清洗 3 次，每次 10 分鐘，作為染劑的 DAPI，其
使用濃度為 1 μg/ml，溶于 0.9%的鹽水里，作用條件為室溫 5 分鐘，然后以
底下使用 UV 光源觀察細(xì)胞
石臘包埋及 H&E 染色
待腫瘤成熟后，以組織切片的方式檢視并證明分化的狀況。將裸鼠背
部皮下的腫瘤取出，以 10%中性福馬林固定后，將標(biāo)本置于一系列遞增的
酒精中脫水，再置換成二甲苯，最后以石臘浸潤包埋。石臘標(biāo)本以滑動式
切片機(jī)，切成 5 微米厚度之切片，將切片于溫水浴中展平，并載于玻片上。
將玻片置于 40℃烤盤過夜，幫助切片與玻片之黏著。之后再將含切片之玻
片置于二甲苯與酒精中漸漸置換為水，進(jìn)行脫臘的步驟，將脫臘后的標(biāo)本
置于蘇木紫染色液，染細(xì)胞核，染色 1~3 分鐘，取出切片以自來水緩緩沖
洗 15 分鐘后，再將切片置于伊紅染色液，染色 5 秒，再經(jīng)過不同濃度的酒
精脫水，退染色，最后浸入 100%酒精及二甲苯內(nèi)澄清切片，即可以阿拉伯
膠樹脂封片
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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