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正文:
培養(yǎng)的基本技術(shù)懸浮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
熒光顯微鏡
培養(yǎng)的基本技術(shù)
設(shè)備、試劑,血清和培養(yǎng)基:開展組織培養(yǎng)工作需要一些特殊
的設(shè)備和試劑,還需要血清和培養(yǎng)基。培養(yǎng)箱(特別是二氧化碳培
養(yǎng)箱),無(wú)菌室、或者超凈工作臺(tái),光學(xué)
顯微鏡,特別是倒置顯微
鏡,各種規(guī)格的培養(yǎng)瓶,包括無(wú)鉀玻璃的或無(wú)毒塑料的,封閉式的
或螺口式的,是最基本的設(shè)備。
懸浮細(xì)胞原代培養(yǎng)法:待培養(yǎng)的組織或瘤塊經(jīng)漂洗和挑選后先
用刀具剖碎,再將這些碎片放置在無(wú)鈣無(wú)鎂(此種情況下細(xì)胞間的
粘附力會(huì)下降)但含有蛋白酶(如胰酶、膠原酶、蛋白酶)或螯合劑
的溶液中溫育使之部分分散為細(xì)胞懸液。
酶或螯合物的工作時(shí)間,工作濃度及溫度等則因組織而異。將
由此所獲得的細(xì)胞以一定的數(shù)量移植至培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),靜置30分鐘至24
小時(shí)不等以俟其貼附在容器的底面上。細(xì)胞增殖到一定數(shù)量即可將
之轉(zhuǎn)移到另一培養(yǎng)瓶以試圖傳代。懸浮細(xì)胞原代培養(yǎng)法的最大優(yōu)點(diǎn)
在于可以同時(shí)進(jìn)行雙份培養(yǎng)以便于對(duì)照,但因剛經(jīng)過(guò)胰酶處理的細(xì)
胞易于凝集,.故此時(shí)的細(xì)胞計(jì)數(shù)未必可靠。
出自http://www.bjsgyq.com/
北京顯微鏡百科
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