標(biāo)題：分離研磨細(xì)胞純化蛋白質(zhì)生物實驗分析顯微鏡
信息分類:站內(nèi)新聞
作者:yiyi發(fā)布
時間:2016-10-2 0:45:22
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正文:
蛋白質(zhì)純化
重組DNA技術(shù)的發(fā)展使蛋白質(zhì)可以在宿主細(xì)胞大量表達(dá)。蛋白質(zhì)的
表達(dá)可以用聚丙烯酰胺凝膠電泳來確認(rèn)，接下來的問題是如何純化蛋白
質(zhì)。純化成功的標(biāo)志是能夠得到大量且純度很高的蛋白質(zhì)。同時達(dá)到這
兩個目的很難，通常用經(jīng)驗方法來解決。
純化的第一個步驟是用機(jī)械破碎或化學(xué)制劑如酶來分離細(xì)胞。機(jī)械
破碎法包括用超聲波(超聲波頻率>20 kHz)破碎膜結(jié)構(gòu)，用很大的壓力
使細(xì)胞通過很小的口從而使細(xì)胞膜破裂，以及用研磨材料如沙子或玻璃
珠來研磨細(xì)胞以使細(xì)胞破碎。
另一種破碎方法是用酶如溶菌酶來破碎革蘭氏陰性菌如大腸桿菌的
細(xì)胞壁或用幾丁質(zhì)酶來破壞酵母的多糖層復(fù)合體。溶菌酶通過裂解在肽
聚糖層N一乙酰基胞壁酸與N一乙�；咸烟前分畣柕亩嗵菍訌�(fù)合體起作
用。復(fù)合糖苷鍵的裂解使細(xì)胞膜容易破碎，同時大腸桿菌的細(xì)胞膜“sa
c”在滲透壓作用下很容易破，輕微的超聲波降解法可以使細(xì)胞質(zhì)釋放
并通過差速離心法使之與細(xì)胞膜分離。
通常通過蛋白質(zhì)的物理性質(zhì)來分離純化蛋白質(zhì)。通過蛋白質(zhì)的一級
結(jié)構(gòu)可以推測蛋白質(zhì)的全長、二硫鍵的含量、溶解性、質(zhì)量及疏水性，
并根據(jù)這些生物信息用不同的純化方法來區(qū)分相似的蛋白質(zhì)。但在許多
情況下新研究的蛋白質(zhì)的序列是未知的。為了獲得序列信息純化蛋白質(zhì)
是必需的，但序列信息對于蛋白質(zhì)的純化也起很大作用。找出蛋白質(zhì)的
物理性質(zhì)并用合適的方法可以使我們用少量的步驟從含有多種雜蛋白的
細(xì)胞裂解物中純化得到目的蛋白
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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