標題：孵育行酶細胞化學反實驗制備-生物圖像顯微鏡
信息分類:站內(nèi)新聞
作者:yiyi發(fā)布
時間:2016-11-14 19:48:19
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正文:
手工切片(徒手切片)
若實驗室條件不具備，沒有以上各種儀器，用雙面刀片徒手切
組織也可進行酶細胞化學反應。手切時應盡可能將組織切薄，一般
能切到0．1nm左右的組織薄片。但是由于孵育液滲透問題，一般只
能在30—40微米厚的組織內(nèi)進行酶反應，而用鈰法時，由于鈰離子
滲透力弱，反應一般只能在20—30pm厚的組織內(nèi)反應。所以手切組
織薄片的酶反應組織，其中央往往反應很微弱，甚至沒有反應，因
此，超薄切片時只能使用組織表面20—40微米的部分。由于手切組
織太厚，酶反應不均一，因此一般只限于酶定位的定性研究，不太
適合于定量研究。孵育
孵育是酶反應的重要步驟。組織切片在孵育液中發(fā)生酶反應，
爾后產(chǎn)生反應產(chǎn)物。每種酶的孵育液配方，一般文獻介紹有幾個，
要注意選擇合適的配方。這往往需要通過實驗和經(jīng)驗來確定。大多
數(shù)酶反應都是與pH有關(guān)的，孵育液必須有良好的緩沖作用，所用的
緩沖系統(tǒng)的能力必須足以對抗水解步驟中通常會釋放出來的酸，孵
育液的pH要精確調(diào)節(jié)。
孵育前為了使組織內(nèi)部建立細胞化學反應所需的pH、離子濃度
等合適的環(huán)境。一般需將組織切片置于沒有底物的孵育液中浸透30
min左右，使組織內(nèi)部建立酶反應所需的pH和足夠的捕捉劑濃度。
然后再入孵育液中進行酶反應。孵育液一般均需新鮮配制，立即使
用，否則會產(chǎn)生底物的非酶性分解而形成人工產(chǎn)物。孵育液中底物
濃度理論上太高會抑制酶活性，但實踐中一般底物濃度是稍過量的
。孵育液中捕捉劑濃度一般也比較高，但太高也會抑制酶活性。另
外，配制孵育液時，一些陰陽離子也是很重要的，它們參與酶促反
應，并與形成的最終反應產(chǎn)物有聯(lián)系，因此，孵育液中必須有合適
的離子種類和濃度參與反應。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
特別聲明：本文出自北京上光儀器有限公司-未經(jīng)允許請勿轉(zhuǎn)載，本文地址：http://www.bjsgyq.com/news/9118.html
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