標(biāo)題：經(jīng)分離后的質(zhì)粒,可用瓊脂糖電泳加以鑒定
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作者:yiyi發(fā)布
時(shí)間:2017-1-20 12:54:52
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正文:
經(jīng)分離后的質(zhì)粒,可用瓊脂糖電泳加以鑒定
質(zhì)粒的分離大致包括細(xì)胞的離解、蛋白質(zhì)和RNA的去除、染色體DNA
與質(zhì)粒DNA分離等幾個(gè)步驟。其中以質(zhì)粒DNA與染色體DNA相分離的步驟
最為關(guān)鍵。
經(jīng)分離后的質(zhì)粒，可用瓊脂糖電泳加以鑒定。不同質(zhì)粒由于其結(jié)構(gòu)
不同，其電泳遷移速度也不同，因而可進(jìn)行分離和檢測。如果把已知分
子量的DNA片段與待測分子量的DNA片段同時(shí)電泳，并比較電泳遷移速率
，可測定后者的分子量。質(zhì)粒DNA經(jīng)限制性內(nèi)切酶水解后，從凝膠電泳
譜上出現(xiàn)的區(qū)帶數(shù)目、每個(gè)帶中相應(yīng)DNA的大小，可以推測出酶切位點(diǎn)
位置和數(shù)目，確定該質(zhì)粒的限制性酶切圖譜。
使用質(zhì)粒DNA小量制備的堿法，是一種非�？煽康姆椒ǎF(xiàn)也有使
用更簡化的步驟。具體改進(jìn)是加入溶液I、Ⅱ、Ⅲ離心后的上清液直接
用異丙醇沉淀，沉淀溶解后即用RNA酶A處理，然后用酚／氯仿以及氯仿
抽提，最后用乙醇沉淀。經(jīng)改進(jìn)后的堿法可節(jié)約實(shí)驗(yàn)時(shí)間，并能保證所
抽提DNA的質(zhì)量。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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