標(biāo)題：SEC實(shí)驗(yàn)的層析柱選擇-細(xì)胞提取液測(cè)定各組分
信息分類:站內(nèi)新聞
作者:yiyi發(fā)布
時(shí)間:2017-3-11 2:40:40
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正文:
SEC實(shí)驗(yàn)的層析柱選擇-細(xì)胞提取液測(cè)定各組分
常規(guī)SEC的層析柱選擇
進(jìn)行常規(guī)SEC，必須選擇適當(dāng)?shù)目罩�。典型柱的大小�?yīng)是內(nèi)徑1
～1．6cm，長度為50～10℃m。附件包括填料儲(chǔ)器，此儲(chǔ)器可裝柱
一次完成。為進(jìn)行精確的溫度調(diào)控或在較冷的室溫下操作，層析柱
的外面可套上溫度調(diào)節(jié)套。然而，由于實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡牟煌�，常在室�?/div>
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
下操作，需加人適當(dāng)?shù)臍⒕鷦６虝r(shí)間(10～15min)的體積排阻高
效液相層析(SE-HPLC)不應(yīng)在低溫下進(jìn)行。確定峰值
洗脫時(shí)，每一蛋白峰的洗脫體積，要以標(biāo)準(zhǔn)蛋白柱的洗脫體積
作為標(biāo)準(zhǔn)，即時(shí)測(cè)定，通常用紫外監(jiān)視器測(cè)定210～220nm或280 nm
處的光吸收值。然而，對(duì)于細(xì)胞提取液，利用部分收集器收集到的
洗脫液，逐一測(cè)定各組分來確定目的蛋白的洗脫體積，這些測(cè)定包
括電泳、免疫印跡法、酶活性的測(cè)定和配體結(jié)合。為便于每一組分
的測(cè)定，這些組分要有足夠的量，因此應(yīng)將每一部分最小化，以減
少估計(jì)洗脫體積時(shí)出現(xiàn)的誤差。例如，0．05～o．2 m1的組分洗出
體積適合用SE-HPLC柱，將有5～10ml的內(nèi)水體積，而對(duì)于常規(guī)柱，
1 m1的組分洗出體積，就可將洗脫體積(Vre)的誤差減少到1％，此
時(shí)的內(nèi)水體積約有l(wèi)OOml。
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