標(biāo)題：轉(zhuǎn)染細(xì)胞理想技術(shù)通常取決于細(xì)胞類型-聚焦顯微鏡
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作者:yiyi發(fā)布
時(shí)間:2017-3-11 22:03:00
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正文:
轉(zhuǎn)染細(xì)胞理想技術(shù)通常取決于細(xì)胞類型-聚焦顯微鏡
GFP結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)染細(xì)胞
轉(zhuǎn)染細(xì)胞最理想的技術(shù)通常取決于細(xì)胞類型。通過(guò)磷酸鈣共沉
淀或者脂質(zhì)體的技術(shù)，DNA很容易轉(zhuǎn)染進(jìn)某些類型的細(xì)胞。然而，
對(duì)于其他類型的細(xì)胞需要電穿孔甚至病毒轉(zhuǎn)染。本書(shū)所描述的是基
于可以買到的脂質(zhì)體試劑FuGENE6轉(zhuǎn)染方法。
準(zhǔn)備要成像的細(xì)胞：將細(xì)胞按一定密度種在6或者12孔板的蓋
玻片上或者分室蓋玻片(如Labtek，Mat-tek)上。
如果使用的脂質(zhì)體試劑要求無(wú)血清培養(yǎng)基，則去除含有血清的
生長(zhǎng)培養(yǎng)基，換成無(wú)
血清的培養(yǎng)基以增加細(xì)胞轉(zhuǎn)染的效率(FuGENE6不需要此步驟)。3
．在一個(gè)無(wú)菌試管中加入100弘1無(wú)血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。4．加3“l(fā)
的FuGENE6試劑，混合。5．加入1pl的o．5p．g／pl的熒光素標(biāo)記
蛋白表達(dá)質(zhì)粒，混合。6．室溫孵育20min。7．每4cm2面積的細(xì)胞
加入100弘1上述混合液。8．孵育直到固定，免疫染色或活細(xì)胞成
像。據(jù)報(bào)道，F(xiàn)uGENE6和許多其他的脂質(zhì)體試
劑對(duì)大部分細(xì)胞的生長(zhǎng)和蛋白質(zhì)的表達(dá)沒(méi)有有害影響，然而，3
～8h后仍然需要換
生長(zhǎng)培養(yǎng)基。例如，假設(shè)此方法中每4cm2的細(xì)胞需要lml生長(zhǎng)培
養(yǎng)基；因此，用無(wú)
血清培養(yǎng)基制備的100弘1脂質(zhì)體一DNA復(fù)合物會(huì)輕微稀釋血清的
濃度。應(yīng)該注意稀釋
的程度。
哺乳動(dòng)物細(xì)胞時(shí)延性共聚焦成像
以下的許多步驟適用于任何配置的顯微鏡，不過(guò)本例是關(guān)于時(shí)
延性共聚焦成像的，這是一個(gè)普通的GFP時(shí)延性成像試驗(yàn)，使用的
是激光掃描共聚焦顯微鏡。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
特別聲明：本文出自北京上光儀器有限公司-未經(jīng)允許請(qǐng)勿轉(zhuǎn)載，本文地址：http://www.bjsgyq.com/news/9562.html
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