解剖顯微鏡哪有賣？兔子解剖實驗的來源和管理！

一.試驗兔只之來源及管理：

        自兔場購得已達性成熟（4～5 月齡）不同毛色之母兔（白色毛之紐西蘭品種和白毛斑黑之加州品種；黑色毛﹑棕灰色毛和黃褐色毛之雷克斯品種）供試驗之用；試驗母兔于試驗前及試驗期間之飼養(yǎng)管理，同顏等所述。

二.母兔之超數(shù)排卵以及配種：

        處理方法參照顏等（1994）所述。即供胚母兔每隔 12 小時皮下注射 0.17 mg FSH（Sigma, No. F8001），共注射 6 次，并于最后一次注射后 12 小時自然配種，同時靜脈注射 100 I.U. hCG 以誘發(fā)其排卵。并在首次配種后 1 小時再配種一次。

三.胚沖洗液及培養(yǎng)液之配制：

        (一)F-10 基礎溶液（Hazieton, No. 56-639-101）〔含碳酸氫鈉 1.2 g/ liter，抗生素（dibekacin sulphate, 0.1 mg/ml, Meiji, Lot. No. DKMD 120）〕。

        (二)胚沖洗液系修改自 Cheng et al.（1989）所示。其配方為 F-10＋0.4% BSA （bovine serum albumin fraction Ⅴ; Gibco No. 8101018IL）＋1% SPRS（superovulated pregnant rabbit serum）; pH: 7.2～7.4。

        (三)胚培養(yǎng)液〔F-10 solution＋1.5% BSA＋10% SPRS〕之配制處理，參照顏等（1994）所述進行。

四.兔 8－細胞期胚之收集和胚葉細胞之分離：

        兔胚于體內(nèi)發(fā)育期別之預估，系參考本研究室張和 Ju et al.之報告。母兔經(jīng)配種后 38 小時被犧牲并被取出其生殖道；再分別沖洗兩邊之輸卵管及子宮。液體回收和胚之收集，以及分離胚葉細胞之方法參照顏等所述。

五.兔 8－細胞期胚及其胚葉細胞被置入空透明帶內(nèi)（＋ZP）之顯微操作：

        固定和吸取管（holding and suction pipettes）之制備、兔胚或卵空透明帶之準備和移置單一（1/8 胚）或二（2/8 胚）枚胚葉細胞入空透明帶內(nèi)（＋ZP）之操作等，同顏等所示。

六.微膠囊包埋已裸露或已裝于透明帶層內(nèi)（＋ZP）之胚葉細胞之方法：

        海藻酸鈣微膠囊材質(zhì)及溶液之配制和微膠囊包埋裸露單一（1/8 胚）胚葉細胞之方法同顏等（1994）所述。而包埋已裝于透明帶內(nèi)（＋ZP）之單一或二枚（1/8 或 2/8 胚）胚葉細胞之方法參照顏等所述。

七.于體外（in vitro ）之液滴培養(yǎng)：

        以微滴培養(yǎng)（microdrop culture, 20 μl）之方式，每 10 微滴被安置于一培養(yǎng)盤（3.5×1.5 cm, Nunclon）底面，其上覆蓋 1～1.5 ml 之礦物油（mineral oil, light; M-3516），再置于 38 ℃、5% CO2、100% 相對濕度之培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

八.經(jīng)包埋之胚或胚葉細胞之置入與回收：

(一)受胚母兔之排卵或偽懷孕（pseudo- pregnancy）處理：

        考慮及胚之發(fā)育期別與受胚母兔子宮腔內(nèi)環(huán)境之生理期別之同步化，以及能彌補胚于體外操作可能發(fā)生延遲生長之現(xiàn)象（Adams, 1970; Binkerd and Anderson, 1979）；因此，在胚移置之過程，預先安排供胚和受胚母兔被靜脈注射 hCG 之時間，令偽孕之受胚母兔之排卵時間，較供胚母兔者約晚 18 小時。

(二)受胚母兔之麻醉與胚置入之腹腔外科手術(shù)：

        經(jīng)偽懷孕處理過之受胚母兔，于腹腔外科手術(shù)前一日被禁食。手術(shù)前先以麻醉劑 xylazin（5.83 mg/kg BW）和 ketamine（25 ng/kg BW）肌肉注射母兔。待母兔被麻醉后，將之固定于手術(shù)板上，剃除其腹部之毛髮，并以酒精棉及濃碘酊消毒擬手術(shù)之部位；之后，再以 23 號手術(shù)刀片沿其倒數(shù)第一﹑二對乳頭間之腹中線，切開約 4～5 cm 長之開口并暴露其生殖道。隨后，立即以經(jīng)生理食理鹽水潤濕之滅菌紗布覆蓋，以備胚之置入。