傳染性雞華氏囊病病毒 (Infectious bursal disease virus, IBDV)結(jié)構(gòu)蛋白 VP2的胺基酸序列僅含有兩個(gè)Cysteine基團(tuán)，分別是位于SD domain的Cys-99與 PA’ domain的 Cys-197。本研究以大腸桿菌表現(xiàn)系統(tǒng)與昆蟲(chóng)細(xì)胞桿狀病毒表現(xiàn)系統(tǒng)生產(chǎn)重組點(diǎn)突變 Cysteine的 VP2蛋白，探討 Cysteine在VP2蛋白中的重要性。大腸桿菌所表現(xiàn)的蛋白有VP2-C99A、VP2-C197A、VP2-C197T、VP2-C197S、 VP2-C99.197A；昆蟲(chóng)細(xì)胞表現(xiàn)系統(tǒng)則表現(xiàn) VP2-C99A及VP2-C197A蛋白。利用純化次病毒顆粒系統(tǒng)-固定化金屬離子親和性層析法 (Immobilized metal-ion affinity chromatography, IMAC)進(jìn)行蛋白質(zhì)純化，結(jié)果顯示大腸桿菌或昆蟲(chóng)細(xì)胞桿狀病毒所表現(xiàn)的 VP2-C99A點(diǎn)突變蛋白仍會(huì)形成次病毒顆粒并可被 IMAC純化，電子顯微鏡下觀察出粒徑約 20- 25 nm。除了VP2-C99A蛋白，其它由大腸桿菌所生產(chǎn)之點(diǎn)突變蛋白皆喪失與 IMAC親和性吸附力。昆蟲(chóng)細(xì)胞所表現(xiàn)之 VP2-C197A突變蛋白，表現(xiàn)量下降，大部份蛋白于 Flow-through及 pH 7.8 binding buffer緩沖溶液被沖堤下來(lái)，此突變蛋白對(duì) Ni-NTA的親和鍵結(jié)能力變?nèi)酰�電子顯微鏡下觀察具有少量似膨脹且不完整的次病毒顆粒構(gòu)型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí) VP2蛋白胺基酸序列中的 Cys-197為 VP2蛋白組裝成次病毒顆粒的重要胺基酸。

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