熒光顯微鏡檢測(cè)診斷膠原性疾病-斑狼滄抗核抗體（ANA）操作

測(cè)試方法：

利用間接性免疫螢光法（Indirect immunofluoresence method）測(cè)定抗核抗體。用HEP-2細(xì)胞做核基質(zhì)，螢光劑（FITC）做為螢光染料。

 血清樣品（一級(jí)抗體）滴在含有HEP-2培養(yǎng)細(xì)胞之玻片上（抗原）

↓抗原－抗體反應(yīng)

滴入加羊抗人體免疫球蛋白結(jié)合FITC（二級(jí)抗體）（Fluroescein Isothiocyanate）

↓

螢光顯微鏡觀察判讀（200X）

使用螢光顯微鏡觀察判讀（200X）

 【注意】

        玻片製成后應(yīng)盡快判讀。若無(wú)法馬上判讀，可先將玻片存放于4℃

          之黑暗處，24小時(shí)內(nèi)判讀。

九、結(jié)果判定：

              (－)：細(xì)胞核內(nèi)無(wú)特異性螢光。

              (±)：細(xì)胞核內(nèi)僅見(jiàn)輕微之特異性螢光。

              (＋)：細(xì)胞核內(nèi)全部或局部可見(jiàn)特異性螢光。

              (++)：細(xì)胞核內(nèi)全部或局部可見(jiàn)顯著的特異性螢光。

              若血清樣品于20X稀釋時(shí)呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)(+，++)，則可視為抗核抗體陽(yáng)性。陽(yáng)性血

              清可能出現(xiàn)下列幾種染色型態(tài)：

均質(zhì)型(homogeneous)

擴(kuò)散型(diffuse)

斑點(diǎn)型(speckled)

核仁型(nucleolar)

不連續(xù)斑點(diǎn)型(discrete speckled)

溷合型

              螢光顯微鏡之BV系統(tǒng)較UV系統(tǒng)之敏感度高，容易判讀結(jié)果。

十、判讀：

1、利用Poly Titer 儀器判讀，操作步驟請(qǐng)參考『Poly Titer系統(tǒng)』。

2、利用CCD可作影像輸出，操作步驟請(qǐng)參考『CCD影像擷取系統(tǒng)』。 

十一、注意事項(xiàng)：

1、盡可能使用新鮮的血清。

2、血清樣品避免冷藏再解凍，否則會(huì)降低抗體效價(jià)及產(chǎn)生非特異性反應(yīng)。

3、勿接觸玻片表面之基質(zhì)細(xì)胞，并勿直接以吸水紙吸乾細(xì)胞之水分。

4、反應(yīng)必須在濕潤(rùn)箱中進(jìn)行。

5、不可使用乳糜血清，否則會(huì)導(dǎo)致非特異性反應(yīng)。

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